β-内酰胺酶

β-内酰胺酶是指能催化水解6-氨基青霉烷酸(6-APA)和7-氨基头孢烷酸(7-ACA)及其N-酰基衍生物分子中β-内酰胺环酰胺键的灭活酶.β-内酰胺酶分为染色体介导酶和耐药质粒介导酶两大类,以其水解对象可分为青霉素酶、头孢菌素酶、广谱酶和超广谱酶四种.

分类方法主要有两个原则:第一种是基于酶的生化及功能特性;第二种方法是基于酶的分子结构.

β-内酰胺酶的功能学分类

第1类  为耐头孢菌素的β内酰胺酶,但不被克拉维酸所抑制,分子生物学分类属于C类.

第2类  为耐青霉素酶、耐头孢菌素酶,可以被克拉维酸所抑制,分子生物学分类属于A和D类

第3类 是依赖锌离子或金属离子的β-内酰胺酶,分子生物学分类属于B类

第4类 是不能被克拉维酸所抑制的耐青霉素酶,但目前在分子生物学上没有分类

β-内酰胺酶的分子生物学分类 

β-内酰胺酶的分子生物学分类方法是基于核酸及氨基酸的序列的差异

A类酶包括多种质粒编码的青霉素酶,活性部位为丝氨酸残基,分子量为29kDa;

B类酶为金属酶,由染色体或质粒编码,酶活性需锌离子参与,可被乙二胺四乙酸(EDTA)抑制;

C类酶的活性部位为丝氨酸残基,分子量为39kDa,其产生与诱导剂有关;

D类酶又称为OXA型(水解苯唑西林)β-内酰胺酶.

活性单位定义:37℃下,每小时分解头孢菌素活性单位的酶量

青霉素酶又称β-内酰胺酶Ⅰ(β-lactamase,EC3.5.2.6),可水解β-内酰胺类抗生素.

适用范围:

1、可以有效的水解β-内酰胺类抗生素,包括:

a青霉素G;

b氨基青霉素类,如氨苄西林、阿莫西林、匹氨西林等;

c羧基青霉素类,如羧苄西林、替卡西林等;

d脲基青霉素类,如呋苄西林、美洛西林等;

e头孢一代及部分头孢二代.

2、可用于注射用β-内酰胺类抗生素药品检验中的无菌检测.

3、可用于口服及其它β-内酰胺类抗生素药品检验中的微生物限度检测.

头孢菌素酶(Cephalosporinase,EC3.5.2.6)属β-内酰胺酶的一种,本品可有效水解头孢类抗生素.该酶能有效的水解头孢类抗生素,使其失去抗菌活性.

适用范围:

1、本品可水解的头孢菌素包括头孢一代至头孢五代:头孢羟氨苄、头孢拉定、头孢克洛、头孢呋辛、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟等.

2、适用于头孢类抗生素原料及注射用头孢类抗生素药品检验中的无菌检测.

3、适用于口服及其它头孢类抗生素药品检验中的微生物限度检测. 

金属β-内酰胺酶属Bush分类3群,Ambler分类B类,该群酶最大特点是可以水解碳青霉烯类等抗生素,而对哌拉西林和氨曲南影响较小,其活性不被克拉维酸等β-内酰胺酶抑制剂所抑制,但可被乙二胺四乙酸(EDTA)所抑制.酶活性中心需金属锌离子的参与,故称为金属β-内酰胺酶.金属β-内酰胺酶可由染色体和质粒介导,可在铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、粘质沙雷菌、肠杆菌属菌、肺炎克雷伯菌、嗜水气单胞菌和不动杆菌等细菌中检出此类酶.我们平时所讲的β-内酰胺酶是一个大概念,包括所有β-内酰胺酶,如葡萄球菌等产生的青霉素酶、革兰阴性杆菌等产生的广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶等,金属β-内酰胺酶也属于β-内酰胺酶分类中的一个种类.

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二、灭菌工艺:a湿热灭菌b干热灭菌c辐射灭菌d气体灭菌

三、水质检测:USP:R2A、PCA(标准平皿计数琼脂)

EP:R2A

日本药典:R2A、PCA

2015版中国药典:R2A

四、模拟灌装:TSB10812-13020胰蛋白胨大豆肉汤TSB已辐照(无菌已辐照)

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培训后知识点增补:

AR与BR的区别:AR是指化学试剂,BR是指生物试剂.我们的微生物培养基属于BR,培养基原材料有的属于AR,二者不分好坏优劣,只是不同分类